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科研服務

全基因組合成

全基因合成簡介

在我們的實驗工作中,如果采用一般實驗手段無法得到目的基因時,可以進行實驗室人工合成。公司擁有成熟的基因合成技術,可根據客戶要求,以具競爭力的價格和快捷的交貨周期提供全基因合成服務及相關服務。合成的基因可以根據客戶的需求連接到不同的載體上,最終提供的產品包括合成報告、測序報告、質粒酶切圖譜、凍干質粒以及含有該質粒的菌株。 


 一、應用領域:

1. 基因突變 / 重組 / 高效表達。

2. 其他方法難以獲得的 cDNA。

3. 合成不同的基因變異或新基因。

4. 用于微芯片的大量 cDNA 。


二、服務特色: 

1. 免費提供基因的參考設計方案,包括設計酶切位點,密碼子優化等。

2. 基因合成周期短,嚴格按照與用戶簽定的基因合成服務協議和保密合同執行。

3. 能合成長度達 10 kb 的基因。

4. 基因克隆到用戶指定或提供的表達載體上。

5. 質量可靠,提供 DNA 測序結果,保證所合成的基因序列100% 準確。


三、服務流程: 

1. 收到客戶提供序列后,確定使用何種酶切位點克隆,克隆到何種載體等等,然后對全序列進行編輯,傳至客戶確認。

2經分析確認達成一致意見后,簽訂基因合成服務協議與保密合同。基因合成服務協議簽定后,客戶需預付50% 的合成費用,本公司方開始合成。交貨期也從即日開始。

3設計Oligo合成方案,在全自動合成儀器上進行單鏈的化學合成。

4通過OVER-LAPPCR,把單鏈Oligo拼接成雙鏈的全長基因。

5PCR產物酶切、純化,連接到質粒中,將質粒轉入細胞株培養。

6提取陽性克隆進行DNA測序,確認插入片段的準確性。

7對可能存在的錯誤位點用定點突變的方法加以改正,再經測序驗證。

8提供實驗報告,包括裝載目的基因的質粒、細菌株、測序圖譜 序列。

9合成完畢后,本公司通知客戶,收到全部貨款,本公司開始發貨 。


四、情況說明 

1. 由于基因結構的復雜性,并不是所有的片段都能順利合成。對于較長的片段或一些復雜結構如重復序列、高 GC 片段等,可能會需要額外的時間調整合成方案。如果發生這種情況,技術人員會及時與您聯系,告知您合成進程。

2. 所合成的基因一般克隆于通用載體中,如需克隆在客戶指定的載體中,我公司會酌情再收取一定的費用,并且交貨時間會適當延長。


五、密碼子優化:

  對于密碼子優化服務,在提供需要優化和合成的基因序列的同時,我們還需要如下訊息:

1. 需要合成的蛋白或 DNA 序列。

2. 宿主表達系統。

3. 兩端的限制性酶切位點。

4. 優化后的序列中需要避免的限制性酶切位點。

5. 優化后的序列中需要保留的限制性酶切位點


六、合成完成后向客戶提供的技術資料與產品 

1. 不少于2ug的含目的基因的通用載體質粒一份。

2. 含上述質粒的大腸桿菌菌株一份。

3. 基因序列100%正確的原始報告測序正本一份。

4. 基因合成報告一份。


七、全基因合成服務要求 

1.  請將您需要合成的基因全序列以 E-mail 或傳真的形式告知公司的業務員或公司的技術員。

2.  請說明實驗的具體要求,如:使用何種酶切位點進行克隆以及需克隆于何種載體等。

3.  測序結果如果發現有錯誤位點,我們會采取相應的技術手段進行修復校對,保證整個序列的正確性。

4.  提供實驗結果:包括實驗操作規程、測序結果、測序彩色峰圖、含有合成基因的質粒及含該質粒的菌體( 穿刺菌 )等。


定點突變


通過實驗方法可以有效地向目的基因片段中引入任何所需的 DNA 變異,包括堿基添加、刪除、點突變等。


(一)服務要求


1. 請您通過業務員或技術員提供需要進行突變基因的全部詳細序列;突變前序列請標注為: Wild sequence ;突變后序列請標注為: Mut sequence 。
2. 請提供突變基因克隆操作的詳細背景資料,例如使用何種限制酶酶切位點、克隆于何種載體等。
3. 請說明實驗的具體要求,詳細情況請參考如下:



客戶常問的幾個問題:

1.如果想在貴公司做與基因工程相關的技術服務,該如何聯系?


可以直接通過業務員或公司的技術部聯系;同時提供詳細的背景資料、實驗要求等。技術人員經過研討后將與您聯系,共同制定實驗方案,并告知您具體的服務價格和完成時間;我們將在收到您同意實驗的文字資料與實驗材料后立即開始實驗。

2.貴公司對我們提供的實驗材料有何具體要求?


(1) 對實驗材料中涉及病原體等危險的材料拒絕接受。
(2) 在實驗材料中涉及到的堿基序列必須以電子版的形式提供. 
(3)實驗中使用的載體等要盡量提供詳細的背景資料(如質粒大小、抗性、拷貝數、多克隆位點等 ) ;如 果為商品化載體,請提供生產廠家及標準名稱;如果所提供載體是您自己構建的,請注明大體結構情況。
(4)實驗中如果使用氨芐青霉素、氯霉素、鏈霉素、卡那霉素以外的抗生素時,抗生素需您自己提供。
(5)您自己提供的引物如果為干品,請標明具體的 OD 數;如果為液體狀態,請標明具體濃度。
(6) 可用甘油菌和穿刺菌的形式郵寄菌體(最好同時提供相應質粒 ) ;如果提供質粒,則質粒的量最好在 4 mg以上;如果提供的是 PCR 產物,則 PCR 產物量最好在 5 mg 以上(最好附有電泳照片 )。
(7) 用于提取 RNA/DNA 的材料要新鮮,采樣時液氮中速凍后保存于 -80 ℃ 冰箱中,并使用液氮或干冰運輸。
(8) RNA 樣品最好用干冰運輸,如果確實沒有條件,可將 RNA 沉淀,在含有沉淀的離心管中加入 100% 乙醇,用冰袋運輸。

3.貴公司能免費提供哪些載體和引物?


公司免費提供測序及 PCR 擴增用的通用引物: Bca BEST Primer M13(-47) 、 Bca BEST Primer RV-M 、 T3 Promoter 、 T7 Promoter 、 AOX 3" 、 AOX 5" 、 pGEX 3" 、 pGEX 5" 以及 SP6 Promoter 等。

4. 基因工程操作服務通常耗時較長,如果想了解實驗進展情況該怎么辦?


公司在每周五以 E-mail 的形式將實驗進展的大體情況通知客戶;您也可以向業務員查詢;也可以直接與技術人員交流溝通。


(二)操作程序


1. 具體聯系方式請參考“ 客戶常問的幾個問題 ”。
2. 如您提供的模板序列為非公司的測序結果,我們將首先對模板進行測序并將與您溝通測序結果。
3. 根據突變方案設計合成突變引物,進行基因突變實驗的 PCR 反應,克隆變異體。
4. 進行 DNA 測序驗證突變序列的正確性。
5. 提供實驗結果,包括實驗操作規程、突變用引物、質粒變異體以及含有該質粒的菌種(穿刺菌)、測序結果、測序彩色峰圖等。
6. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通載體上的單點突變的時間約需 10 天左右。



(三)收費標準


突變點1個2個3個3個以上
<1000bp¥1500¥2500¥3500詢價
1000-2000bp¥2000¥3500¥4500詢價
時間20個工作日25個工作日30個工作日協商
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